ATCC細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng)，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

　　ATCC細(xì)胞的培養(yǎng)試劑分析：

　　一、紡錘體阻斷劑

　　在有絲分裂過程中，隨著紡錘絲的形成，染色體被牽引到一起難以觀察其形態(tài)。紡錘體的形成在于細(xì)胞質(zhì)和紡錘體成分的粘度之間的平衡，因此，改變細(xì)胞質(zhì)的粘度，即可破壞紡錘體形成，從而使得染色體均勻散開，且染色體縊痕區(qū)更為清楚。

　　在培養(yǎng)中使用的紡錘體阻斷劑為秋水仙素，在終止培養(yǎng)前加入適量秋水仙素，使正在分裂的細(xì)胞停留在中期，以獲得大量分裂相供分析之用。秋水仙素的濃度范圍比較寬，一般使用濃度0.05-0.8微克/毫升，在終止培養(yǎng)前處理2-4小時(shí)。但在實(shí)際工作中需要借助濃度和處理時(shí)間來(lái)控制染色體的收縮程度。秋水仙素作用時(shí)間越長(zhǎng)，被阻斷的中期分裂相越多，但是染色體也越凝聚和收縮，所以還視各實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)而定。

　　二、ATCC細(xì)胞低滲液

　　低滲液是指滲透壓和離子強(qiáng)度均低于正常細(xì)胞生理?xiàng)l件的溶液，如水、低滲的檸檬酸鈉或氯化鈉、甘油磷酸鉀（0.65M）、KCl（0.075M）等。低滲效果取決于低滲液的化學(xué)組成、低滲的溫度和處理時(shí)間。低滲處理是憑借反滲透作用使細(xì)胞膨脹染色體鋪展，同時(shí)可使粘附于染色體的核仁物質(zhì)散開，以便能在一個(gè)平面上觀察所有染色體形態(tài)。實(shí)驗(yàn)室中一般選用0.075MKCl為低滲液（具體情況取決于實(shí)際操作，鑒于實(shí)驗(yàn)的連續(xù)性和穩(wěn)定性，本實(shí)驗(yàn)室采用0.35%KCl），其優(yōu)點(diǎn)有：

　　1.染色體輪廓清楚，可染色性強(qiáng)，染色時(shí)間短。

　　2.用于顯帶染色時(shí)能充分顯示帶型特點(diǎn)。低滲處理為37℃，15-25分鐘，以預(yù)實(shí)驗(yàn)條件為準(zhǔn)。

　　三、固定液

　　固定液的重要特性是能迅速穿透細(xì)胞，將其固定并維持染色體結(jié)構(gòu)的完整性，還要能夠增強(qiáng)染色體的嗜堿性，達(dá)到優(yōu)良染色效果。單純的固定液一般難以達(dá)到這些要求，因此在實(shí)驗(yàn)中使用兩種混和的固定液。

　　Carnoy固定液（甲醇:冰乙酸=3:l）每次使用前需臨時(shí)配制，長(zhǎng)時(shí)間放置影響固定效果，固定時(shí)間15分鐘至24小時(shí)，冰箱、室溫均可。必要時(shí)可改變甲醇和冰乙酸的比例，冰乙酸比例增加，利于細(xì)胞膨脹、染色體鋪展，但易導(dǎo)致細(xì)胞破裂、染色體散失。

　　四、滴片

　　滴片使細(xì)胞懸液從一定高處落在載玻片上，淋巴母細(xì)胞膜破裂，染色體分散開。載玻片可用冰片和干片，效果均好。滴片后需空氣干燥。

　　五、Giemsa染色

　　Giemsa染料不是一種單一染料，而是天青、伊紅、甘油和甲醇的混合物，配制后原液儲(chǔ)存。在常規(guī)染色中，并不比其他染料*，但在顯帶技術(shù)中，卻是*的。

　　Giemsa工作液在使用前臨時(shí)配制，濃度可在2.5-10%之間（原液2份加pH7.4磷酸緩沖液10-40份）。染色后，染色質(zhì)呈紅色，細(xì)胞核是藍(lán)色。

>> 返回首頁(yè)